前列腺癌方面免疫组化基础知识优质整理

March 1, 2021, 9:50 a.m. 文档页面

【文章导读】前列腺癌的免疫组化标记物,发表时间:2013-5-13 来源:中外健康文摘2013年第10期供稿 作者:胡新梅 于民 姜敏,1,,1 前列腺特异性抗原 前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)是分子量34000的单链糖蛋白,

文章介绍图片

  

【正文内容】

前列腺癌的免疫组化标识物,发布時间:2013513来源于:东西方身心健康刊物2013年第10期供稿创作者:胡新梅于民姜敏,1,1前列腺非特异抗原体前列腺非特异抗原体(prostatespecificantigen,PSA)是含量34000的多肽链糖蛋白,由237个碳水化合物组成,它是一种丝氨酸胰蛋白酶,使凝结的精夜融解、汽化。它是在1979年做为前列腺腺上皮细胞的标识物被发觉的。血清蛋白PSA现阶段已被广泛运用于前列腺癌的初期筛选。,2,PSA在一切正常前列腺、前列腺增长、前列腺癌、前列腺上皮细胞内瘤,均呈阳性表述,定坐落于上皮细胞细胞的胞质中,而在前列腺转移癌则呈呈阴性表述,因而PAS呈阳性提醒恶性肿瘤来源于前列腺上皮细胞,

可用以区别前列腺癌与前列腺转移癌5。PSA在前列腺良、恶变变病中都呈阳性表述,故PSA不可以用以辨别良恶变变病。基本上全部的前列腺癌(除开分裂最烂的癌和极少数激素治疗后发作的进度期癌之外)PSA标识都呈阳性,而高分化前列腺癌的PSA表述强过低分化前列腺癌,说明PSA表述与分化程度相关。而针对分裂太差的癌,即便PSA呈阴性也不可以彻底清除前列腺癌,也要融合别的查验综合性考虑到。有时候PAS呈阳性可发生在前列腺之外的机构和恶性肿瘤,但一般为局灶性弱阳6。,3,5HarveyAM,GriceB,HamiltonC,eta1.Diagnosticutilityofp504s/p63cocktail。

prostatespecificantigen,andprostaticacidphosphataseinVerifyingprostaticcarcinomainvolvementinseminalVesicles:astudyof57casesofradicalprostatectomy,specimentsofpathologicstagepT3bJ.ArchPatholLabMed,2010,134(7):983988.6BostwickDG,QianJ,RamnaniDM.Immunohistochemistryoftheprostateandbladder。

testisandrenaltumors.In:DabbsDJ,ed.DiagnosticImmunohistochemistry.Philadelphia:ChurchillLivingstone,2002.40733,4,CK34El2,1984年,Gown等7最先报导了CK34El2,它是一种高含量5700066000的细胞角蛋白。CK34El2标识良性前列腺机构,仅在前列腺基底细胞的细胞膜及其细胞质中表述,而没有前列腺代谢上皮细胞细胞表述,故CK34El2可做为对前列腺的基底细胞层开展可选择性的标识8。因为基底细胞消退是确诊前列腺癌的关键组织学根据,而苏木素伊红染色切成片分辨基底细胞是不是存有常十分困难。

因而用CK34El2标识基底细胞就变成前列腺良恶变诊断的关键方式之一。,5,在一切正常和良性增长及其上皮细胞内瘤的前列腺腺管,软管周边产生持续或时断时续的CK34E12遍布。而前列腺癌的腺管的基底细胞层彻底消退,因此最后主要表现为CK34E12不表述。但CK34E12标识基底细胞可一部分呈阴性,对经尿道口电切的标本采集,常因标本采集经人为因素灼烧而受影响,因而稳定性和可靠性较差。有200%的前列腺癌软管腺癌和筛状癌周边有持续或中断的基底细胞,而一部分良性前列腺变病,如腺病和不完全性委缩的腺泡周边基底细胞可一部分乃至彻底消退。表明基底细胞消退并不是确诊前列腺癌的肯定指标值。而免疫组化实际操作不善,则有可能发生假阴性結果而错诊。故免疫组化結果应融合HE切成片中的别的组织学特点综合性分辨。

6,P63,1998年,Okada等9分离出来更新遗传基因P63,P63是P53抑癌基因大家族的组员,坐落于人们染色体3q2729。P63能非特异地标识前列腺基底细胞,呈胞核呈阳性,黄棕色颗粒,因此能够表明基底细胞的存有,而前列腺的代谢上皮细胞细胞则呈呈阴性10。绝大部分的前列腺良性增长及低等级上皮细胞内瘤的腺管的周边展现持续性的P6三分布;而高级别上皮细胞内瘤由此可见P63不一样水平的中断消退,而前列腺癌中腺管周边P63为呈阴性,表明基底细胞早已彻底的消退。因而,P63也可用以前列腺癌的诊断。,7,CK34E12、P63均可用以标识基底细胞,而做为确诊前列腺癌的强有力方式。P63与CK34El2对比,具备下列优势:一部分CK34E12标识呈阴性的基底细胞。

P63标识可呈阳性;对有灼烧的经尿道口电切的前列腺标本采集,P63标识結果相对稳定。P63标识基底细胞呈核呈阳性,結果非常容易分辨,情况较为清楚。缺陷则是其呈阳性表述是中断的,当异常腺泡较少时,分辨其基底细胞是不是消退有时候较为艰难。在具体运用中,二者具备相辅相成功效。,8,基底细胞消退是前列腺癌的关键确诊根据,但部分的基底细胞缺少却不可以做为确诊前列腺癌的唯一标准。因为前列腺癌可有残余的基底细胞,并且浸润性癌在管腔内外扩散及良性腺管深陷癌机构中11,因而某些前列腺癌中CK34El2与P63亦有呈阳性表述。极少数前列腺增长变病基底细胞标识亦呈呈阴性表述,表明极少数前列腺良性腺管基底细胞可以不持续或不可以被确认存有,这也提醒基底细胞免疫系统标识物呈阴性不可以独立做为诊断恶变的指标值。

9,羟基辅酶A消旋酶(P504s),2001年Jiang等12初次将P504s抗原运用于前列腺癌的确诊。P504s即羟基辅酶A消旋酶((alphamethylacylCoAracemase),其遗传基因定坐落于染色体5P13,它所编号的蛋白质由382个碳水化合物构成,在碳键油酸的空气氧化和衍化全过程中起功效。P504s在前列腺癌中高表述,而在一切正常中前列腺机构中则呈呈阴性或灶区弱阳。Jiang等在所检验的137例前列腺癌中检出率达到100%,并明确提出P504s是前列腺癌高宽比敏感度和非特异的标识物。,10,P504s呈阳性,CK34El2和p63呈阴性,能从正反面适用前列腺癌确诊,进而进一步提高前列腺癌的确诊准确率13。

殊不知,临床医学上并不是全部的前列腺癌全是P504s呈阳性,CK34El2及p63呈阴性,也并不是全部的前列腺良性变病全是P504s呈阴性,CK34El2及p63详细呈阳性。杨京哲14等的实验中,P504s不但在前列腺癌中有高表述,并且在前列腺上皮细胞内瘤中也高表述,这说明P504s不仅对前列腺癌比较敏感,而且对PIN也十分比较敏感,故用P504s只有差别前列腺良性增长,而不可以把前列腺癌和PIN辨别起来。,11,2004版WHO中,P504s在前列腺癌的检出率为80%之上,但在一些前列腺癌如粘状腺癌、委缩性癌、假增长性癌和医治后前列腺癌中检出率较为低。并且P504s在12%的良性增长,17.5%的前列腺腺病,委缩型腺管及其90%之上的高级别PIN中呈阳性反应。

除此之外,P504s在前列腺之外的恶性肿瘤如尿路上皮癌、肠癌、肾肿瘤及其良性肾源性囊腺瘤也可呈阳性。这说明P504s沒有机构非特异,并不是前列腺癌的非特异标识物。,12,总的来说,免疫组化在前列腺癌确诊中的运用具备关键使用价值,但绝不允许彻底借助免疫组化去确诊前列腺癌,独立的P504s(或基底细胞标识物)呈阳性或呈阴性均不可以诊断前列腺癌。仅有将机构病理学形状与免疫组化染色結果融合起來,全方位剖析,综合性分辨,才可以合理地防止错诊。,13,免疫系统酶细胞化学实验操作技术性好用免疫系统细胞与核苷酸技术性(周德山),免疫系统酶细胞有机化学是免疫系统细胞有机化学(Immunocytochemistry,ICC)中最常见的方式之一,它是在抗原和抗体特异性反映存有的必要条件下。

凭借酶细胞有机化学的方式,检验某类化学物质(抗原体/抗原)在机构细胞内存有位置的一门新技术应用:即事先将抗原与酶相互连接,再使其与机构内特异性抗原体反映,经细胞有机化学染色后,于电镜或透射电镜下观查剖析的组织学研究思路。,14,为摆脱莹光抗原法的不够、能够在超微结构水准精准定位抗原体化学物质的存有位置,Nakane(1966)等取得成功地引进了酶替代莹光黑色素标识抗原,开展机构细胞内抗原体或半抗原的精准定位,开拓了酶标抗原技术性免疫系统酶细胞有机化学之途。融合小编工作经验,详细介绍ICC染色中的关键程序流程:机构标本采集的固定不动、切成片、染色基本原理及流程、結果判断及一些进度、独特运用等供阅读者参照。,15,第一节固定不动和切成片,一、固定不动若想要理想化的ICC染色結果、恰当地分辨抗原体化学物质在机构细胞内的部位。

除须要优良酶和抗原外,维持机构细胞内抗原体化学物质的没动性(Immobility)和免疫系统特异性也是尤为重要的。换句话说,假如抗原体化学物质在机构细胞间弥漫、遗失或丧失免疫系统特异性,不管怎样勤奋染色全是白费的,所以说固定不动是ICC染色中十分关键的一环。ICC与其他病理学技术性不一样,除规定储存优良的构造外,还需储存机构抗原体的免疫系统特异性。一般觉得,新鮮机构可以最大限度地储存机构抗原体的免疫系统特异性,但构造较弱,易发生抗原体弥漫遗失状况。,16,Cumming(1980)汇报,不固定不动的组织切片ICC染色时,环鸟苷酸成分遗失80%之上。固定不动的目地是使组成机构细胞成份的蛋白质等化学物质不溶解水和溶剂,并快速使机构细胞中各种各样酶溶解、降解,避免机构自溶和抗原体弥漫。

维持机构细胞的一致性和所需检验化学物质的抗原性。因而快速充足固定不动是ICC染色取得成功的重要一步。用以ICC的固定不动剂类型较多,挑选时要依据所要检验化学物质的抗原体特性和切成片方式及其常用抗原特点等做最好挑选。制片人及固定不动方式见第一章,下边详细介绍二种近年来报导的新方式。,17,1AMEX(AcetoneMethEnzoateXylene)法是改进的冷冻换置法(freezesubstitution)的通称,关键用以石蜡包埋标本采集。Sato(1986)汇报,该法具备同新鮮(未固定不动)机构冰冻切片一样的抗原体维持性和石蜡切片的优良组织架构储存。其体制为:机构在甲苯中固定不动(脱干),机构细胞内水分慢慢被甲苯替代,随之,用苯甲酸酯替代机构内甲苯。

经二甲苯换置后,石蜡包埋。机构在20甲苯内留宿亦产生冰霜,因此原方式将机构先置4甲苯2030min,再移进20甲苯留宿。事实上机构在4甲苯内留宿也可以获得一样实际效果。当在该固定不动液内添加小量胰蛋白酶特异性阻滞剂,并选用低熔点石蜡包埋等,可得到更优染色結果。,18,微波加热固定不动(Microwavefixation),为近些年所瞩目的难题之一。该方式能保持稳定的组织架构和抗原性,适合各种各样切成片的酶组化、ICC及其免疫系统透射电镜等原材料固定不动。其固定不动原理很有可能与微波加热(頻率10003000MHz)具备被水份消化吸收的特性(一般常用的微波加热是頻率2450MHz,光波长12厘米);生物技术带有很多水分,直射后,溫度上升,分子热运动加速,

推动固定不动液向机构内渗入,加快与机构成份的反映,短期内内做到固定不动的实际效果等相关。经微波加热直射固定不动的机构,需置同样固定不动液中,再次固定不动26h,室内温度。,19,二、切成片,电镜ICC染色,常见的有冰冻切片和石蜡切片二种,二者都有其优点和缺点,应依据抗原体的特性、试验室标准,有效挑选之。对不明抗原体表明时,最好是另外运用。冰冻切片为ICC研究室优选。,20,Shi(1991)等汇报:微波炉加热直射的切成片,可以激话一部分核内抗原体特异性。其体制不清,很有可能与高溫、高烧的功效,使核内DNA发夹结构解除,DNA、RNA离解,抗原体曝露相关。其流程为:将切成片脱腊水清洗后,置染色瓶中,添加双蒸水或缓冲溶液至短板处,不断数次直射,每一次1min,直射510次。

专项治理相关推荐  
三九文库 www.999doc.com
备案图标苏ICP备2020069977号