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免疫标记技术.ppt

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免疫标记技术,Immunolabeling technique,1,第一节 免疫标记技术的基本要素,一、免疫标记与标记免疫的定义 二、常见的免疫标记化学物质,2,免疫标记与标记免疫,免疫标记技术: 标记物与免疫活性物质的连接 技术 标记免疫技术: 以标记免疫化学物质检验相对靶化学物质的技术,3,免疫标记技术 =,免疫技术 标记技术,酶,荧光素,放射性核素,其他,4,常见的免疫标记化学物质,类型 标记物 主要用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫剖析测量 放射性同位素 3H、14C、32P、57Gr 免疫剖析测量 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫剖析测量 电化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫剖析测量 金属材料颗粒物 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫剖析测量。

5,第二节 标记免疫技术的归类,一、按标示标记化学物质区划的种类 二、按测量方法区划的种类 三、按测量主要用途区划的种类,6,1、酶免疫技术 2、莹光免疫技术 3、放射性免疫技术 4、金免疫技术,按标示标记化学物质区划的种类,7,1、均相型(homogenous) 2、非均相型(heterogeneous),按测量方法区划的种类,8,均相型(homogenous),非均相型(heterogeneous),9,1、免疫测量技术 2、免疫组化技术,按测量主要用途区划的种类,10,第三节 酶标记技术,一、常见标记方法 二、标记免疫物的分离出来与评定,11,常见标记方法,1、常见酶 辣根乳酸脱氢酶(HRP) 碱性磷酸酶(AP) 2、标记方法 戊二醛化学交联法 过碘酸盐空气氧化法。

12,戊二醛化学交联法 (一步法),抗体 NH2 COH (CH2)3 COH NH2 酶,抗体 NH2 =CH (CH2)3 CH = NH2 酶,抗体 NH2 =CH (CH2)3 CH = NH2 抗体,酶 NH2 =CH (CH2)3 CH = NH2 酶,13,戊二醛化学交联法(二步骤),COH (CH2)3 COH NH2 酶,抗体 NH2 CHO (CH2)3 CH = NH2 酶,抗体 NH2 =CH (CH2)3 CH = NH2 酶,14,过碘酸盐空气氧化法,NaIO4,O,O,OH, NH2抗体,O,O,O,N,N,抗体,抗体,H2O,N,抗体,NaBH4,Schiff碱。

酶 五炭糖环,15,标记免疫物的分离出来与评定,1、分离出来 目地:除去分散酶 方法:蛋白质变性、柱层析 2、评定 抗体特异性 酶促反应 标记物纯净度,16,酶联免疫吸咐试验 enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ),17,ELISA基础的试验全过程,18,ELISA技术的基本原理与方法,间接性法 夹心巧克力法 竞争法,19,间接性法,20,夹心巧克力法,21,竞争法,22,第四节 莹光标记技术,一、常见标记方法 二、标记免疫物的分离出来与提纯,23,常见标记方法,1、荧光素的定义 2、微生物标记荧光素的规定 3、常见荧光素标记基本原理与方法,24,微生物标记荧光素的规定,1、具备与蛋白共价融合的工作能力 2、莹光高效率 3、能与情况化学物质产生迥然不同 4、不危害蛋白的微生物、免疫特异性 5、标记方法安全性、简单 6、标记物平稳。

易储存,25,莹光抗体技术的基本原理与方法,立即法 间接性法 补体法 双标记法,26,立即法,间接性法,补体法,双标记法,27,标记免疫物的分离出来与评定,1、分离出来 目地:除去分散荧光素 方法:柱层析 2、评定 抗体特异性 标记物融合度 F/P比率的运用实际意义,28,第五节 放射性同位素标记技术,一、常见标记方法 二、标记免疫物的分离出来与提纯,29,立即法(氯胺T法),Na125I 4。C,125I,氯胺T,30,间接性法(联接法), Na125I,氯胺T,125I,NSHPP,31,融合相,分散相,放射性免疫分析方法的基本原理与方法,32,常见标记方法,1、常见放射性同位素 2、125I 的标记方法 立即

33,标记免疫物的分离出来与评定,1、分离出来 目地:除去分散放射性同位素 方法:柱层析 2、评定 分散放射性同位素成分 免疫特异性 比放射性物质(mCi/mg)运用实际意义,34,第六节 胶体金标记免疫技术 (金标法),胶体金是由氯化金与氧化剂反映产生的一种胶体溶液颗粒物,具备吸咐蛋白的特点(能够 标记Ag或Ab); 胶体金颗粒物具备呈色视,中等水平尺寸的胶体金颗粒物展现枣红色。 胶体金标记免疫技术是将金颗粒电子光学检验的协调性和抗原体抗体反映的非特异紧密结合。,35,胶体金免疫法与RIA、ELISA等方法对比,有很多优势:,1.它不需ELISA法中所规定的功效的底物和显色剂,使实际操作更简单;,2.胶体金法零污染,

没有伤害作业者即环境污染;,3.胶体金标抗体在干冻情况下室内温度存储较平稳,有效期限长;,4.敏感度高。,36,免疫标记技术的较为,FIA ELISA RIA 敏感度 较低 高 高 非特异 高 高 高 可重复性 差 好 好 检验目标 Ag/Ab Ag/Ab Ag,37,

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