免疫组化结果的分析和判断新增

Feb. 28, 2021, 6:43 p.m. 文档页面

【文章导读】免疫组化结果 分析和判断,1,第一节 免疫组化结果的判断原则 免疫组化结果的判断原则概括起来有以下几点:,2,必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内; PCNA及p5

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【正文内容】

免疫组化結果 剖析和分辨,1,第一节 免疫组化結果的分辨标准 免疫组化結果的分辨标准归纳起來有以下几个方面:,2,务必另外设对比染色。沒有对比染色的免疫组化染色結果是不能信的。 抗原表述务必在特殊位置。如LCA应精准定位在细胞质上;CK应精准定位在体细胞浆内; PCNA及p53蛋白质应精准定位在细胞质内;EMA应精准定位在细胞质上,这些。没有抗原所属位置的阳性上色,一概不可以视作阳性。,3,阴性結果不可以视作抗原不表述。因为检验方式 敏感度有高矮之分,有时候可因染色方式 敏感度不足,而造成 阴性反映,分辨时要留意。,4,尽可能绕开流血、萎缩及切成片刀纹和页面边沿体细胞的阳性表述,尤其是酶免疫系统标识。由于这类阳性上色多为内源性影响,或系人为失误而致。

5,对免疫组化标识結果的实际意义不可以绝对,应融合临床医学材料、X线等影像诊断及试验結果综合分析。,6,第二节 对比染色设计方案,7,(一)对比染色的目地 设对比的目地是为了更好地清除假阴性和假阳性。假阴性的缘故关键有三:机构处理错误,抗原遗失太多或被遮掩;抗原降解、效价过低或稀释液度不适合(关键指一抗,即特异性抗体);染色流程忽略及错漏,或显色剂的挑选、缓冲溶液的pH和电离度不善等。,8,假阳性均系由多种多样要素导致的特异上色而致,缘故关键有:自发性莹光或内源性酶等影响;抗原试剂不纯(尤其是一抗);错误操作,如环境污染、切成片变枯或显色剂实际操作不善等;Fc蛋白激酶的影响,这些。,9,(二)对比的类型以及采用目地 对比染色大概可分成阳性机构对比、阴性机构及阴性试剂对比和本身对比四大类:。

10,阳性机构对比 指的是已确认带有靶抗原的同宗及不一样源组织切片或体细胞玻片与待检试验切成片另外作一样解决和免疫系统染色的机构对比。恰当的結果应展现阳性,目地是为了更好地确认常用免疫组化染色步骤的实效性,清除假阴性的很有可能。,11,阴性机构对比 指的是已确认没有靶抗原的同歩解决和免疫系统标识染色的机构对比。恰当的結果应是阴性,目地是以外假阳性。,12,阴性试剂对比 就是指用以确认在免疫组化染色中常用试剂,尤其是特异性抗体试剂的实效性和稳定性而所开设的同歩免疫系统染色对比,包含有:空白试验;取代对比;消化吸收实验和抑止实验,等。目地取决于以外假阳性和确认常用免疫组化试剂以及技术性方式 的实效性和待检试验切成片免疫系统标识阳性結果的稳定性。

13,空白试验 意指缓冲溶液(PBS、TBS等)替代第一抗原(关键的,必需时还可做第二抗原及桥联抗原的空缺替代),别的各步不会改变的试剂对比染色,結果应是阴性。,14,替代对比 意指常用方式 第一抗原同宗小动物的一切正常血清蛋白,或与本试验不相干的抗原(靶微生物缺损的)替代第一抗原,别的流程不会改变的试剂对比染色,結果应是阴性。 消化吸收实验 就是指用事前历经量抗原消化吸收的第一抗原上清液替代第一抗原,别的流程不会改变的免疫系统染色试剂对比。結果应以阴性或阳性上色显著变弱(消化吸收不全天)。,15,抑止实验 就是指用标识抗原和未标识抗原(能够 是一抗,还可以是二抗或桥抗原)二者的化合物作试剂,别的流程不会改变的免疫组化染色试剂对比,結果其阳性上色应成占比的变弱(相等或1:9)。

此试剂对比多用以立即法。,16,这类阴性试剂对比的采用标准是:空白试验不可以省,别的对比在预实验中应尽可能多做,尤其是运用新抗原试剂;对比必不可少与试验片顺利进行染色;对比的結果应附合规定。,17,本身对比 就是指在同一标识切成片上的本身机构成份的阴性情况对比。即与靶抗原阳性反映体细胞或成份邻近的阴性情况构造的着色,結果应是阴性或上色偏浅,需与阳性上色成份呈迥然不同。目地取决于清除内源影响造成的假阳性和因抗原弥漫挪动导致的不正确結果。,18,第三节 特异染色,19,特异染色就是指免疫组化染色全过程中造成的非靶抗原的呈色結果,属假阳性,又被称为情况上色,能比较严重影响免疫组化染色結果的恰当分辨,应极力防止或缓解。其缘故涉及到免疫组化染色步骤的各个阶段。

可来源于:,20,内源影响(自发性莹光、内源性酶、内源生物素等);试剂环境污染(品质差,交叉式反映,Fc蛋白激酶影响等);机构处理错误(机构固定不动不立即或固定不动欠佳所造成 的抗原弥漫挪动、清洗不充足所造成 的分散试剂残余等)。,21,改正的方式 视缘故而异,可在预实验基本上,选用有目的性的改正防范措施,即对症治疗(实际改正方式 不进行讲了,学生们能够 自身阅读文章教材p123 126) 。,22,第四节 阳性标识的形状特点和分辨,23,24,免疫系统着色抗压强度和阳性体细胞相对密度是判定定量分析指标值,具体工作中中常会选用抗压强度和相对密度融合的方式 综合性计量检定,与抗原成分相关;阳性体细胞的上色形状及机构遍布特性主要是精准定位指标值,与作用相关。,25,一、阳性标识免疫系统特点:分弱( )、中( )、强( )三级。

免疫荧光法(FITC为例子) 则主要表现为淡绿色莹光、显著翠绿色莹光和亮翠绿色夺目莹光;,26,免疫系统酶标识(HRP DAB/H2O2)则主要表现为浅黄色细颗粒物、黄棕色颗粒物和褐淡黄色粗颗粒物,后面一种夺目易见。一般照片照像,正常情况下多取强阳性地区。,27,二、阳性标识细胞学特点(以HRP DAB/H2O2为例子) 可分成胞膜型;胞异倍体;胞质(浆)型;厚壁组织型和复合性(胞膜 胞质兼具,胞核 胞质兼具,或厚壁组织 胞质兼具)等五种阳性体细胞种类。这与抗原所属位置关联,但应留意清除因机构固定不动不太好造成的抗原弥漫错觉,尤其是复合性图象。,28,29,30,31,32,三、阳性标识病理学特点(以HRP DAB/H2O2为例子) 免疫组化染色阳性体细胞在机构中的遍布排序方式能够 有以下7种:局灶型。

弥漫型;片块型;网状结构型;腺管形;腔缘型和菊团型,等。这关键在于抗原抗原一氧化氮合酶在体细胞内的遍布和阳性体细胞在机构内的人群遍布特性。,33,四、阳性标识抗压强度特点 按照体细胞阳性上色水平(抗原成分),可分成弱阳性( )一分;中等水平阳性( )2分;强阳性( )三分。按照阳性体细胞总数,可分成:弱阳性( ,指阳性体细胞数量在25%下列);,34,中等水平阳性( ,指阳性体细胞数量在25I%);强阳性( ,指阳性体细胞数量在50%之上)。现阶段多选用積分综合性计量检定。计算方法为:( )%x1 ( )%x2 ( )%x3;总标值1.5者为( )。最少任意观查5 10个HPF。,35,第五节 染色不成功的很有可能缘故。

36,免疫组化染色的基础规定有二:试验切成片的阳性抗原精准定位精确,呈色独特,情况上色浅或无,二者的比率应超过1(阳性/情况);对比染色的結果应附合规定。不然,个人所得试验結果全是不正确的,或者是为假阳性或者是为假阴性。,37,假阳性就是指试验切成片呈阳性,阴性机构对比或阴性试剂对比也呈阳性的結果,此谓假阳性。其缘故与内源影响,试剂不纯,交叉式反映等相关。,38,假阴性就是指试验切成片呈阴性,阳性机构对比及阴性试剂对比也均呈阴性的結果,此谓假阴性。其缘故与机构处理错误,细胞组织抗原遗失或试剂不正确(如漏加、错加、无效、霉变等),错误操作等相关。,39,对比結果分辨:,40,染色不成功缘故: 均为阴性 均为弱阳性(除阴性对比) 情况染色过深 阳性对比好。

待检标本采集弱阳性 阳性对比无情况,待检标本采集情况深,41,分辨标准: 实验方案设计 抗原挑选 抗原精准定位性 抗原遍布不均一性,42,鉴别假阴性 抗原遗失或变弱 抗原降解 实际操作不善 鉴别假阳性 抗原弥漫 抗原紊乱表述 瘤细胞吞噬 变病中一切正常机构残余 抗原交叉式反映 内源化学物质上色,43,边沿反映、刀纹、皱褶、萎缩或挤压成型地区不当作分辨根据,运用“ 正反面法”标准 免疫组化规范化: 抗原非特异 抗原交叉式反映和标识谱系 方式 规范性 結果综合分析和分辨,44,

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